hplc分析方法 高效液相色谱有几种定量方法?其中那种是比较精确的定量方法?并简述?

作者:匿名      投稿日期:2019-03-07

简述HPLC-UV,HPLC-Ms,HPLC-DAD的各分析方法

  都有高效液相系统,后面的连用不一样:UVZhi紫外检测器,可以是固定波长的,也可以是Quan波长(DAD)的。Ms指质谱。DAD指Quan波长扫描紫外检测。

高效液相色谱含量测定中分析方法认证的主要内容

  含量方法学认证主要考察以下几个性质:  1Zhuan属性:查看被测物质与被测结果间是否正确Qie唯一对应。  Kao察方法:将处被测成分外的其他物质均做空Bai干扰对照,包括流动相、辅料空白、溶剂空Bai、其他成分(多组分产品)空白、如果方法You衍生还应包括衍生空白等等。  2精密度:Cha看方法多次测定是否能够得到相同的结果。  Kao察方法:重复性试验,应包括仪器精密度(Dui照多次进样查看偏差),方法精密度(多次Ce定同一样品查看结果,该测定应包含全部试Yan过程,即配制多个供试品溶液),中间精密Du(不同人员不同时间不同仪器,最好试剂和Shi验室也更换,测定同一样品,查看结果偏差)。RSDYing小于2%  3准确度:测得结果与实际量Jian是否一致。  Kao察方法:通过回收率试验来确定,应包含3Ge浓度至少9个样品的测定结果,测定时应采Qu对照品(或原料)加辅料等其他干扰,计算Hui收率和结果偏差。视方法而定一般回收率应Zai95~105%,RSD小于2%  4线Xing:在线性范围内,测得峰面积与被测物质的Liang是否能够呈线性关系。  Kao察方法:线性试验,应取至少5个浓度点,Hui制标准曲线,计算线性相关系数,液相色谱Fa中一般认为R=0.9999以上才能算呈Xian性。  5定量限:当物质达到定量限浓度Yi上时,该方法可以对该物质进行定量检测。  Kao察方法:当被测物峰高:信号噪音=10:1Shi,当前浓度即为定量限。如果想做更加可靠De实验,应在定量限处考察精密度和回收率。  6Nai用性:方法对实验环境的耐受程度。即当实Yan条件发生细微变化时,方法仍然能够保持测Ding的准确。  考Cha方法:通过几项实验来确定:溶液稳定性(Xiang同溶液在几小时内多次进样查看结果),色Pu条件变化(应包括柱温、流速、色谱柱批次、Jian测波长等条件的轻微变化)。

高效液相色谱有几种定量方法?其中那种是比较精确的定量方法?并简述?

  色谱定量分析是根据组分检测响应讯号的大Xiao,定量确定试样中各个组分的相对含量。其Yi据是:每个组分的量(重量或体积)与色谱Jian测器产生的检测响应值(峰高或峰面积)成Zheng比。具体到特定方法,主要有下列方法:  1.Gui一化法  当样品中所有组分能全部Liu出色谱柱,并在检测器上都能产生相应信号(De到色谱峰)时,常采用归一化法。  Ci = mi/m×100% = fi•Ai /Σ fi•Ai ×100%  * You点:简单方便, 不受进样量及操作条件波Dong的影响  * 缺点:所有组分都必须出峰, Mei个组分都必须有校正因子  2.外Biao法(又称标准曲线法)  配制Yi知浓度的标准样品进行色谱分析,测量各组Fen的峰面积或峰高,作峰面积(或峰高)和浓Du的标准曲线,然后在与标准样品分析相同操Zuo条件下,进入相同量(一般为体积)的未知Yang品,测得被分析组分的峰面积(或峰高),Zai标准曲线上即可查得相应的浓度。  Zai工厂的日常控制分析中大多数采用这种方法,Fen析结果的准确性主要取决于进样量的重复性He操作条件的稳定性。  Ci = mi/m×100% = fiAi/m×100%  * Xiao正:标准曲线、两点法、单点法    * You点:简便、无需所有组分都出峰(校正因子),Jing常用于几个组分的分析  * 缺点:操作Tiao件波动的影响较大,进样量影响大    3.Nei标法  由于吸附或化学反应等Yuan因,色谱柱不能使所有的组分都流出来,或Zhe各组分都能流出,但检测器不能对所有组分Du给出相应的色谱峰,或者有的样品含量过大(De不到完整的峰),或者过小,或者只要求定Liang分析复杂样品中几个组分,均可采用内标法。  Guo程:在总量为m样品中如入质量为mS的内Biao物S,然后根据被测物和内标物的重量和在Se谱图上相应的峰面积比求出某组分i,的含Liang  mi/ms = fiAi / fsAs  Ci = mi/m ×100%  = fiAi ms / fsAs m×100%    * You点:不需所有组分都出峰(校正因子),操Zuo条件和进样量基本无影响  * 缺点:内Biao物难找--稳定无反应、结构性能,相似、Bao留时间内插并完全分离  * 注意:内标Fa比较适用于低含量组分的分析, 一般选作Nei标物的物质,最好在样品中不存在,其保留Zhi在所有组分保留值的中间,加入内标物的含Liang和待测组分含量不应相差很大。  4.Die加法(内加法)  内加法Shi用于较特殊的情况:图谱上没有适当位置可Cha入内标峰,或因各种条件限制无合适的内标Wu时。  此时可先以样品出一Zhang图,再在样品中加入一定量被测组分后再进Yang,看峰面积增加了多少,由此比例来求出原Shi含量。

如何分析高效液相色谱图

  分析色谱图  手动进样步骤 配置好流动Xiang,将滤嘴洗头放入流动相页面内,打开泵和Jian测器,快跑排除气泡,设置既定流速,稳定Yi段时间,让基线跑平,用液相针吸取称量融Pei脱气后的对照(含量已标定),打开定量环Jiang液相针里的液体匀速注入定量环中,拔出针Tou好立刻关闭六通阀,一般随六通阀关闭电脑Zi动采样,等主峰跑完整后记录其峰面积,一Ban跑两个对照,每个对照跑两针,共四针。然Hou开始注称好溶配脱气后的样,以对照主峰的Bao留时间来判断样品中目标峰的位置,外标法Yi峰面积计算供试品中某物质的含量。  X=[SYang*K /m样(1-水分)]*对照品含量% *100  X:Gong试品的含量(%);  S样:供试品的主Feng面积;  K:单位面积对照品的质量  mYang(1-水分):称取供试品折干后的质量(mg);  XDui:对照品的含量(%);

高效液相色谱法中定性和定量依据是什么?在HPLC中的定量方法有哪些

  定性依据的是保留时间。  定量依据的是Yu对照品的比对。  HPLC中常用的定量Fang法(主要以峰面积为基础),有:外标一点Fa,外标两点法,外标标准曲线,内标一点法,Nei标两点法,内标标准曲线;归一化法在一定De条件下也可以用作定量。

如何建立好药物含量的高效液相色谱分析方法

  1,首先必须去进行配制药物溶液前处理的Gong作。找出该药物的溶解性,探索出该药物的You效溶剂,使该药物能在该溶剂中充分溶解,Zhe是药物溶液配制的前处理必然途径,也是进Xing高效液相色谱含量分析的首要条件。  2,Ran后就是根据该药物配制溶液的前处理方法,Pei制好适当浓度的药物溶液,利用该药物溶液,Zai紫外-可见分光光度计上进行紫外扫描,找Dao该药物的最大吸收波长,确立适合的高效液Xiang色谱分析的检测波长。因为它是进行高效液Xiang色谱含量分析的基本条件  3,再是色谱Zhu的选择:根据药物的极性来选择合适极性的Se谱柱类型  4,再是流动相的确立。配制Yi系列的流动相,考察合适的流动相。  5,Zai是准确度考察。通过精密度、重复性和重现Xing的考察来衡量仪器的准确度  6,接着是Xian性关系考察。配制不同浓度的一系列溶液,Jin行其溶液的色谱扫描。根据所得的不同浓度Xia的药物峰面积作为纵坐标(Y轴)、以溶液Nong度为横坐标(X轴)进行线性回归,得到其Xian性图,考察其线性程度,即线性相关系数R=?。Kao察的目的就是:为了我们在做含量分析时,Xuan择一个合适的浓度进行检测,不至于你配制De待测溶液浓度范围不在线性范围之内,造成Ce量结果的错误。  7,再是最低检测浓度He检测限的考察。目的是为了考察这种方法的Shi用性,是否符合痕量分析的要求。  8,Zai是回收率考察。目的是考察方法的准确性。  9,Zai是稳定性考察。目的是考察试验方法的时间Xing,指导我们在分析检测时,建立合适的溶液Pei制到进样的时间段,保证实验结果的准确性。  10,Zui后是专属性考察。

高效液相色谱的原理及分析方法?

  原理主要有这几种:  液—液分配色谱法  (Liquid-liquid Partition Chromatography)Ji化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) Liu动相和固定相都是液体。流动相与固定相之Jian应互不相溶(极性不同,避免固定液流失),You一个明显的分界面。当试样进入色谱柱,溶Zhi在两相间进行分配。达到平衡时,服从于高Xiao液相色谱计算公式: 高效液相色谱计Suan公式  式中,cs—溶质在固定相中浓度;cm--Rong质在流动相中的浓度; Vs—固定相的体Ji;Vm—流动相的体积。LLPC与GPCYou相似之处,即分离的顺序取决于K,K大的Zu分保留值大;但也有不同之处,GPC中,Liu动相对K影响不大,LLPC流动相对K影Xiang较大。 a. 正相液 — 液分配色Pu法(Normal Phase liquid Chromatography): Liu动相的极性小于固定液的极性。 b. Fan相液 — 液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): Liu动相的极性大于固定液的极性。 c. Ye — 液分配色谱法的缺点:尽管流动相与Gu定相的极性要求完全不同,但固定液在流动Xiang中仍有微量溶解;流动相通过色谱柱时的机Xie冲击力,会造成固定液流失。上世纪70年Dai末发展的化学键合固定相(见后),可克服Shang述缺点。现在应用很广泛(70~80%)。  Ye—固色谱法  流动相为液体,固定相Wei吸附剂(如硅胶、氧化铝等)。这是根据物Zhi吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制Shi:当试样进入色谱柱时,溶质分子 (X) He溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生Jing争吸附(未进样时,所有的吸附剂活性中心Xi附的是S),可表示如下:Xm nSa ====== Xa nSm Shi中:Xm--流动相中的溶质分子;Sa--Gu定相中的溶剂分子;Xa--固定相中的溶Zhi分子;Sm--流动相中的溶剂分子。 Dang吸附竞争反应达平衡时: K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa] Shi中:K为吸附平衡常数。[讨论:K越大,Bao留值越大。]  离子交换色谱法  (Ion-exchange Chromatography) IECShi以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离Zi交换树脂上可电离的离子与流 离子交Huan色谱柱  动相中具有相同电荷的溶质离子Jin行可逆交换,依据这些离子以交换剂具有不Tong的亲和力而将它们分离。以阴离子交换剂为Li,其交换过程可表示如下: X-(溶Ji中) (树脂-R4N Cl-)=== (Shu脂-R4N X-) Cl- (溶剂中) Dang交换达平衡时: KX=[-R4N X-][ Cl-]/[-R4N Cl-][ X-] Fen配系数为: DX=[-R4N X-]/[X-]= KX [-R4N Cl-]/[Cl-] [Tao论:DX与保留值的关系] 凡是在溶Ji中能够电离的物质通常都可以用离子交换色Pu法来进行分离。  离子对色谱法  (Ion Pair Chromatography) Li子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与Rong质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或Fan离子 ) 加到流动相或固定相中,使其与Rong质离子结合形成疏水型离子对化合物,从而Kong制溶质离子的保留行为。其原 离子色Pu仪流程示意  理可用下式表示:X 水相 Y-Shui相 === X Y-有机相 式中:X Shui相--流动相中待分离的有机离子(也可是Yang离子);Y-水相--流动相中带相反电荷De离子对(如氢氧化四丁基铵、氢氧化十https://www.fanwen99.cn/article/104694587.html六烷Ji三甲铵等);X Y---形成的离子对化He物。 当达平衡时: KXY = [X Y-]You机相/[ X ]水相[Y-]水相 Gen据定义,分配系数为: DX= [X Y-]You机相/[ X ]水相= KXY [Y-]Shui相 [讨论:DX与保留值的关系] Li子对色谱法(特别是反相)发解决了以往难Yi分离的混合物的分离问题,诸如酸、碱和离Zi、非离子混合物,特别是一些生化试样如核Suan、核苷、生物碱以及药物等分离。  离子Se谱法  (Ion Chromatography) Yong离子交换树脂为固定相,电解质溶液为流动Xiang。以电导检测器为通用检测器,为消除流动Xiang中强电解质背景离子对电导检测器的干扰,She置了抑制柱。试样组分在分离柱和抑制柱上De反应原理与离子交换色谱法相同。 以Yin离子交换树脂(R-OH)作固定相,分离Yin离子(如Br-)为例。当待测阴离子Br-Sui流动相(NaOH)进入色谱柱时,发生如Xia交换反应(洗脱反应为交换反应的逆过程): Dan体图示  抑制柱上发生的反应: R-H Na OH- === R-Na H2O R-H Na Br- === R-Na H Br- Ke见,通过抑制柱将洗脱液转变成了电导值很Xiao的水,消除了本底电导的影响;试样阴离子Br-Ze被转化成了相应的酸H Br-,可用电导Fa灵敏的检测。 离子色谱法是溶液中阴Li子分析的最佳方法。也可用于阳离子分析。  Kong间排阻色谱法  (Steric Exclusion Chromatography) Kong间排阻色谱法以凝胶 (gel) 为固定Xiang。它类似于分子筛的作用,但凝胶的孔径比Fen子筛要大得多,一般为数纳米到数百纳米。Rong质在两相之间不是靠其相互作用力的不同来Jin行分离,而是按分子大小进行分离。分离只Yu凝胶的孔径分布和溶质的流动力学体积或分Zi大小有关。试样进入色谱柱后,随流动相在Ning胶外部间隙以及孔穴旁流过。在试样中一些Tai大的分子不能进入胶孔而受到排阻,因此就Zhi接通过柱子,首先在色谱图上出现,一些很Xiao的分子可以进入所有胶孔并渗透到颗粒中,Zhe些组分在柱上的保留值最大,在色谱图上最Hou出现。  分析方法:  综述  色Pu柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的Gui定.常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅Jiao。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用,Xin基键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有Shi用;离子交换填料,用于离子交换色谱;凝Jiao或玻璃微球等,用于分子排阻色谱等。注样Liang一般为数微升。除另有规定外,柱温为室温,Jian测器为紫外吸收检测器。 在用紫外吸Shou检测器时,所用流动相应符合紫外分光光度Fa项下对溶剂的要求。 正文中各品种项Xia规定的条件除固定相种类、流动相组分、检Ce器类型不得任意改变外,其余如色谱柱内径、Chang度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、Hun合流动相各组分的比例、柱温、进化学键合Gu定相反应  样量、检测器的灵敏度等,均Ke适当改变, 以适应具体品种并达到系Tong适用性试验的要求。一般色谱图约于20分Zhong内记录完毕。 2.系统适用性试验 An各品种项下要求对仪器进行适用性试验,即Yong规定的对照品对仪器进行试验和调整,应达Dao规定的要求;或规定分析状态下色谱柱的最Xiao理论板数、分离度和拖尾因子.  色谱柱De理论板数  在选定的条件下,注入供Shi品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液,Ji录色谱图化学键合固定相应用  ,量出供Shi品主成分或内标物质峰的保留时间t(R)He半高峰宽W(h/2),按n=5.54[t(R)╱W(h/2)]^2Ji算色谱柱的理论板数,如果测得理论板数低Yu各品种项下规定的最小理论板数,应改变色Pu柱的某些条件(如柱长、载体性能、色谱柱Chong填的优劣等),使理论板数达到要求。  Fen离度  定量分析时,为便于准确测量,Yao求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分Li度。分离度(R)的计算公式为: 2[t(R2)-t(R1)] ,R= -W1+W2 Shi中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留Shi间; t(R1)为相邻两峰中前一峰的保Liu时间; W1及W2为此相邻两峰的峰宽。 Chu另外有规定外,分离度应大于1.5。  Tuo尾因子  为保证测量精度,特别当采Yong峰高法测量时,应检查待测峰的拖尾因子(T)Shi否符合各品种项下的规定,或不同浓度进样De校正因子误差是否符合要求。拖弗因子计算Gong式为: W(0.05h) T=-2d1 Shi中 W(0.05h)为0.05峰高处的Feng宽; d1为峰极大至峰前沿之间的距Li。 除另有规定外,T应在0.95~1.05Jian。 也可按各品种校正因子测定项下,Pei制相当于80%、100%和120%的对Zhao品溶液,加入规定量的内标溶液,配成三种Bu同浓度的溶液,分别注样3次,计算平均校Zheng因子,其相对标准偏差应不大于2.0%。

高效液相色谱法研究分析方法学有哪些

  精密度,准确度,线性,专属性,耐用性

如何进行液相分析方法开发

  最主要考虑的因素就是色谱柱。使用柱子之Qian一定要看色谱柱的允许范围。还要考虑样品Yao求及仪器要求,还要考虑流动相要求等。最Hou就要考虑分离要求。当然了一般来说,我们Tong常的反相色谱柱温对分离的影响不是特别的Da。只有在分离要求非常苛刻的时候才考虑柱Wen情况。 拿C18柱子举例吧,一般温度要Qiu是25度-30度,当然温度与室温越接近,Na温度越容易恒定,对保留影响越小,所以通Chang都用25或30度的柱温。但据我使用总结Lai说,为了分析方法通用化,多使用25度的Zhu温,当遇到多种梯度尝试之后,在两峰分离Huan有一点不太好的情况下,这时把柱温提到40Du,对分离还是有帮助的,有时能达到基线分Li

高效液相色谱实验,如何确定及优化色谱条件

  在高效液相色谱分析中,分离条件的优化是Zhi在选定的色谱柱上(即柱容量恒定条件下)Lai实现:    (1)在保证一定分Li度的条件下,实现分析速度的最优化。  (2)Zai保证一定分析时间的条件下,实现难分离物Zhi对分离度的最优化。  在色谱分析中,分Li度、分析速度和柱容量三者之间的关系,呈Xian幻想的三角形,即其中任一因素都要受到另Wai两个因素的制约,因此至今也未曾找到高分Li度、高柱容量和快速分析三者同时存在的色Pu分析系统。在任何情况下,色谱分析都只能Yan三角形中的一个边,去实现最佳参数的选择,Ji越要在一个方向上实现最佳化,则在另外两Ge参数上的损失也越大。

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